Dag 1 - Rening av rekombinant plasmid

Då har min labbpartner och jag renat fram våran plasmid som (vilket vi sedan ska verifiera) har LL-37 genen som insert.

Vi har kortfattat lyserat bakterieceller (E.coli), renat och separerat celldebris från de plasmider som vi velat ha m.h.a QIAgen prep. Har vi gjort rätt så har vi förhoppningsvis renat bort så mycket föroreningar som möjligt.
Med föroreningar menas oönskad material, så som RNA kromosolamt DNA(vi vill ha plasmid DNA), proteiner och annat celldebris.

Efter att ha renat fram plasmiden så var det dags att koncentrationsbestämma den genom spektrofotomtri. Vi spädde plasmidlösningen 100 gånger för att sedan skanna den i spektrofotometern mellan våglängderna 230 nm-300nm.
Vid två våglängder, 260 och 280 noterades absorbansen ner.

Vid 260 har DNA:T sin absorbanstopp och 280 har RNA sin absorbanstopp. Genom att dividera absorbanserna uppmätta vid dessa två våglängder för vi en siffra, ett värde, som fungerar som en riktlinje för hur rent provet är.

Får man en kvot mellan 1,8 och 1,9 så är provet "rent". Får man en kvot lägre än 1,8 så kan det indikera att det finns protein i provet. Får man en kvot högre än 2 är det en indikation på att det möjligtvis finns RNA kvar i provet efter rening.

Vid första anblick av resultatet av våran rening, så är min labbpartner och jag väldigt nöjda med resultat. Vi hade en kvot på 1,84 och en beräknad koncentration 3,5 mikrogram/mikroliter.
Vilket labbhandledaren bekräftade var ett bra resultat.